簡要描述:上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑PEI轉(zhuǎn)染注意要點(diǎn) 化學(xué)名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉(zhuǎn)染級(jí)訂貨號(hào)#: 9002-98-6 規(guī)格:1G 品牌:BIOHUB CAS#: 9002-98-6,26913-06-4 分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000
產(chǎn)品分類
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品牌 | 其他品牌 | CAS | 9002-98-6 |
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分子式 | CH2CH2NH | 分子量 | MW 25000 |
貨號(hào) | 78pei25000 | 規(guī)格 | 100mg`5g |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
BIOHUB品牌線性PEI轉(zhuǎn)染試劑說明書
BIOHUB品牌
PEI轉(zhuǎn)染注意要點(diǎn)
化學(xué)名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉(zhuǎn)染級(jí)
訂貨號(hào)#: 9002-98-6 規(guī)格:1G 品牌:BIOHUB CAS#: 9002-98-6,26913-06-4
分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000 熔點(diǎn): 73-75º
溶于:熱水,低pH冷水,甲醇和乙醇。 不溶于:苯,乙酉迷和丙酮
外觀:白色至黃色固體 處理:手套和通風(fēng)櫥
儲(chǔ)存:在室溫下避光干燥儲(chǔ)存
配置:1:稱取100mg線性聚乙烯亞胺,加新鮮的細(xì)胞級(jí)別的水90ml,加鹽酸至PH=3左右, 加熱至80℃左右攪拌過夜溶解PEI,
2:用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的濾器過濾,分裝后儲(chǔ)存于4℃,保質(zhì)期可以達(dá)到12個(gè)月。
轉(zhuǎn)染操作流程:
◆ 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法 1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請(qǐng)自行確定適合檢測時(shí)間。
◆穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法
1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。
2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。
5.轉(zhuǎn)染 24 h 后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。 „
上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑特別提醒
1. PEI 25K含有4-11%的殘留丙酰基,這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合,所以批間轉(zhuǎn)染效率可能會(huì)有比較大的差異,建議一個(gè)批次可以多購買,PEI 25K穩(wěn)定性在室溫干燥避光下可穩(wěn)定保存10年以上(雖然有效期標(biāo)注只有18個(gè)月左右)
2. 對(duì)于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著 提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為 70~80%。
3. 對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。
4. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是 DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。
5. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。
6.本手冊(cè)只是一個(gè)基本操作手冊(cè),具體轉(zhuǎn)染過程中需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化方向?yàn)榛旌蠒r(shí)間,轉(zhuǎn)染時(shí)間,DNA混合比列.......
7.Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品,每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測,保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實(shí)驗(yàn)室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dna RNA純度,細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度,分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴,針對(duì)極個(gè)別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復(fù),對(duì)于產(chǎn)品產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率不高,轉(zhuǎn)染批間有差異,轉(zhuǎn)染不了等問題,不作為評(píng)價(jià)我們售后工作的依據(jù)。
如果我們提供的PEI手冊(cè)都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻(xiàn),多調(diào)整一下轉(zhuǎn)染條件,找出適合自己細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們配置好細(xì)胞轉(zhuǎn)染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解
8.部分?jǐn)?shù)據(jù)參考,本數(shù)據(jù)來源于網(wǎng)絡(luò),不作為售后投訴依據(jù)
上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑和DNA配比數(shù)據(jù)
細(xì)胞型號(hào) | 培養(yǎng)基 | 每孔細(xì) 胞數(shù) | DNA的量 | 轉(zhuǎn)染試劑量 | 和培養(yǎng)基混合 4-6h |
293H | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
293FT | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
293E | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
293F | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
COS7 | DMEM | 1.5×104 | 0.4µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
hela | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL | 1640+15?S |
Caco2 | MEM | 3.5×104 | 0.3µg | 0.75µL | MEM+10?S |
BHK21 | MEM | 2×104 | 0.2µg | 0.5µL | MEM+10?S |
CHO-DG44 | DMEM+HT+pro | 2×104 | 0.5µg | 0.5µL | DMEM+HT+pro +10?S |
RAW264.7 | DMEM | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | DMEM +10?S |
MCF7 | MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat | 2×104 | 0.1µg | 0.25µL | MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10?S |
SW480 | IMDM | 3×104 | 0.4µg | 0.5µL | IMDM +10?S |
MDCK | DMEM | 4×104 | 0.6µg | 1µL | DMEM+10?S |
CHO-K1 | IMDM+Pro | 3×104 | 0.2µg | 0.5µL | IMDM+Pro +10?S |
HepG2 | DMEM | 3×104 | 0.5µg | 0.75µL | DMEM+10?S |
A549 | DMEM | 2×104 | 0.3µg | 0.5µL | DMEM+10?S |
NIH/3T3 | DMEM | 1.5×104 | 0.1µg | 0.75µL | DMEM+10?S |
vero | DMEM | 3×104 | 0.3µg | 0.75µL | DMEM+10?S |
sf9 | SIM SF | 5×104 | 0.4µg | 0.75µL | SIM SF+10?S |
轉(zhuǎn)染效率
細(xì)胞種類 | 中文名稱 | PEI 轉(zhuǎn)染效率 |
HEK293 | 人胚腎細(xì)胞 | 90%-95% |
293-T | 人胚腎細(xì)胞 | 90%-95% |
CHO-K1 | 倉鼠卵巢細(xì)胞 | 80%-90% |
U251 | 人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | 80%-90% |
Hela | 人源宮頸癌細(xì)胞 | 70%-80% |
COS7 | 猴SV40轉(zhuǎn)化腎細(xì)胞 | 70%-80% |
HepG2 | 人源肝癌細(xì)胞 | 70%-80% |
NIH/3T3 | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | 60%-70% |
膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 | 人源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 | 60%-70% |
Patu8988 | 人源胰腺癌細(xì)胞 | 60%-70% |
U2OS | 人源骨肉瘤細(xì)胞 | 60%-70% |
上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格表
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌. |
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23966-1 | Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) | 1g | polysciences |
78pei25000 | 線性聚乙烯亞胺 分子量25000 | 100mg | biohub |
78pei25000 | 線性聚乙烯亞胺 分子量25000 | 1g | biohub |
78pei25000 | 線性聚乙烯亞胺 分子量25000 | 5g | biohub |
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